PacBio：高准确率的长读长

PacBio 的核心技术是 单分子实时测序（SMRT），由美国太平洋生物科学公司（Pacific Biosciences）开发。PacBio SMRT / HiFi（Circular Consensus Sequencing, CCS）：单个 DNA 分子被做成环状模板，在酶驱动下重复读多个循环，生成多次覆盖同一分子后合并成高精度的 HiFi 读（既长又高准）。HiFi 读的准确率可以达到短读长可比的水平（>99%）。

测序原理

PacBio 的测序过程可以形象地理解为“观察 DNA 聚合酶跳舞”：

零模波导孔（ZMW）：每个 ZMW 孔只允许单个 DNA 分子进入，背景噪音极低。

荧光标记的核苷酸：四种碱基（A、T、C、G）分别标记不同颜色的荧光。

实时监测：当聚合酶将荧光标记的碱基掺入 DNA 链时，会发出特定颜色的光信号，实时记录碱基序列。

特点

读长：可达 10 kb–100 kb

准确率：HiFi 模式下 >99.9%，和 Illumina 短读长相媲美

应用：基因组组装、结构变异检测、全长转录本测序

如果说三代测序曾经“长但不准”，PacBio HiFi 就是那个把“长 + 准”结合在一起的方案。