Matrigel matrix丨康宁基质胶使用指南-1

Matrigel matrix

    在体内，基底膜是以细胞为基础的薄层细胞外基质。康宁 Matrigel matrix 是从富含胞外基质蛋白的 EHS 小鼠肿瘤中提取的基底膜基质，其中含有约 60%层粘连蛋白、30% IV 胶原和 8%的巢蛋白。康宁 Matrigel matrix 还含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、组织纤溶酶原及其他生长因子。

1包被涂层方法：

  康宁基底膜基质可以以几种方式使用。薄层凝胶法适用于在凝胶顶部接种细胞，厚层凝胶法允许您在三位基质内培养细胞，薄层包被法(不凝胶化)给您提供了复杂的蛋白质层，您可以在其上培养细胞。您的选择基于您想要实现的zui终结果，无论是细胞生长、附着还是分化。

  注意：在康宁支持网页上发布了具体的应用程序*。康宁基底膜基质产品的蛋白质浓度是批次特异的并提供在分析证明书上。通过计算需要的特定蛋白浓度(mg/mL)获得了稀释康宁基底膜基质产品的一致结果。为了维持凝胶化的一致性，我们推荐不要将康宁基底膜基质稀释到少于 3 mg/mL。请使用冰冷的无血清培养基来稀释康宁基底膜基质。通过在冰上移液管上下吸液或涡旋小瓶来混合。

薄层凝胶法

  1. 依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质混合至均匀。

  2. 将培养板放置在冰上，以 50 µl/cm2向生长表面加入康宁基底膜基质。

  3. 将培养板放置在 37 °C ，30 分钟。

  4. 如果有必要的话，请在使用无血清培养基轻柔漂洗前吸出未结合的材料。请确保移液器的吸头不要刮擦包被的表面。培养板现在可以使用了。

厚层凝胶法

  1.  依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质混合至均匀。

  2. 将培养板放置在冰上。向康宁基底膜基质中加入细胞并使用预冷的移液管悬浮。以150-200 µl/cm2向生长表面加入康宁基底膜基质。

  3. 将培养板放置在 37°C，30 分钟。现在可以添加培养基了。细胞也可以培养在这一凝胶的顶部。

薄层包被法

  1. 依照推荐的方法解冻康宁基底膜基质。使用预冷的移液管，将康宁基底膜基质混合至均匀。

  2. 使用无血清培养基将康宁基底膜基质稀释到需要的浓度。对于您的应用程序，您应该完成以经验为主的研究来确定您的zui适包被浓度。

  3. 向被包被的容器中加入稀释的康宁基底膜基质。加入的量应该足以容易地覆盖整个生长表面。在室温下培养 1 个小时。

  4. 吸出未结合的材料并使用无血清培养基轻柔地漂洗。培养板现在可以使用了。

细胞复苏：

  康宁中性蛋白酶(货号 354235)，康宁细胞复苏溶液(货号 354253)。使用康宁细胞复苏溶液在冰上 7 小时内解聚康宁基底膜基质能够实现将生长在康宁基底膜基质上的细胞zui有效地复苏，或者使用中性蛋白酶，考虑到连续培养，中性蛋白酶作为一种金属酶可以分散细胞。