色谱填料常见的基础知识

2023-05-25

一.色谱填料的基本特点:

1.五大类层析技术

①.凝胶过滤(GF)

②.离子交换(IEX)

③.亲和层析(AC)

④.疏水层析(HIC)

⑤.反相层析(RPC)

2.基架:颗粒越细、大小越均匀,分辨率越高,但反压亦较高(SOURCE基架例外)

3.物理稳定性:新一代介质较坚固,能承受高流速,但反压亦较高(SOURCE基架例外)

4.化学稳定性:新一代介质能承受极端PH,高盐度,促溶剂和有机溶剂,利于开发分离条件和在位清洗(CIP),大大延长介质寿命并提高重复性。


二.如何选择层析填料:

1.按照层析技术原理分类选择填料

2.层析工艺不同阶段选择填料的一般规律

3.根据目的物的性质选择填料


三.按照层析技术原理分类选择填料

1.凝胶过滤填料选择:

①.原理:是根据分子量大小分离物质的一种层析方法

②.精度:分子量差别一倍以上

③.重点:选择分离范围

④.类型:Sephadex、Superdex、Sephacryl、Sepharose、Superose


2.离子交换填料选择:

①.原理:根据生物分子的表面电荷性质进行分离纯化,可以应用在层析的各个阶段

②.重点:在于选择合适的分辨率

③.基架类型:Sepharose、Source、Capto、Sephadex、纤维素


3.亲和填料选择

①.原理:根据生物分子之间的特异相互作用分离纯化蛋白质,只要有合适的配基,即可采用亲和层析

②.重点:选择合适的配基

③.选择:抗体以及Fc融合蛋白、重组的标签蛋白、族特异性生物分子、预活化的亲和填料


4.疏水填料选择

①.原理:根据蛋白质上的疏水性质分离

②.重点:选择填料的疏水性强弱

③.选择:苯基高取代>苯基低取代>辛基>丁基>异丙基>醚基


5.反相填料选择(根据分辨率的高低依次为):

①.uRPC C2/C18:只有预装柱形式,HPLC分析柱

②.SOURCE 5RPC:只有预装柱形式,用于分析

③.SOURCE 15RPC:用于精细纯化

④.SOURCE 30RPC:良好的可防性


6.选择合适的厂家:

色谱材料的可选择性十分的广泛,因为需求的不同,标准化的色谱填料产品往往达不到所需的要求,因此根据需求进行定制化产品成为了一种常见的选择,金山科研平台可为您定制:任意粒径,任意键合相,多孔径等多种功能化填料,为您解决从实验室到中试以及工业生产的分析和制备色谱。


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