超滤是大分子脱盐、浓缩zui方便的方法，重复性好，得率有保障，已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作；在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法。

Millipore的Amicon® Ultra超滤管采用离心方式快速处理样品，是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是，在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前，我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得zui佳体验，更重要的是，宝贵的样本会遭受本可避免的损失！

选对截留分子量，事半功倍

如果目的蛋白是120kDa，请问应该选择的超滤管规格是100k，50k，还是30k甚至10k？你采用的是1/2，1/3抑或1/6算法？这些没有统一的说法，是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。Millipore的超滤管采用其特有的再生纤维素膜，定义为：一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel®再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据：

(以0.5mL的AU0.5为例，其它型号截留分子量的选择原则一致，具体离心力和离心时间不同。)

截留分子量选小啦！看到这个表，你是否发现原来抱怨Millipore超滤管流速偏慢的根源来自对于Millipore截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是di一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子)，在Millipore再生纤维素超滤膜体系内，选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是zui佳选择，这样操作起来又快又好，既保证了样品回收率，又缩短了离心时间，大幅降低大分子损伤风险。

因为样品分子形状不同，为了zui大化样品的回收，对于没有参考的样品，可以初步选择截留分子量约为目的分子分子量1/2的超滤管。

倒转离心，zui大化回收率

收取体积已经很小的浓缩好的样品时，你会：

A 购买zui尖细的枪头，把样品吸回来

B 浓缩倍数低一点，以便用枪头把样品吸回来

C 反转离心回收，获得授权得率

正确答案“C”,你答对了么？

反转离心回收

①.反转离心回收设计使蛋白样品，特别是小体积样品高效回收，避免枪头吸取造成的样品丢失或操作错误

②.0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式

现在你总该知道为什么收到AU0.5的时候会有两个外管了吧～

脱盐浓缩，一个超滤管搞定

浓缩用超滤管，脱盐用透析袋或脱盐柱，这是很多实验室一直沿用的实验操作。其实呢，超滤管做“脱盐+浓缩”，也是很多蛋白操作高手的小诀窍。我们Millipore官方中文说明书特别给大家提示了这个方法——用更少的工具和更短的时间，减少转移误操作和样品损失，却能获得更好处理效果，你get了吗？

Q&A:

Q: Amicon® Ultra超滤管的膜材质是什么？

A: Amicon® Ultra超滤管的膜材质为默克密理博特有的 Ultracel® 再生纤维素膜，生产工艺严格，截留分子量明确而精准，蛋白吸附损失zui小。

Q: 如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少？

A: 按照经验，我们推荐两个蛋白的分子量要相差一个数量级（10倍）。

Q: Amicon® Ultra超滤管可以用于病毒浓缩么？

A: 可以。对于慢病毒，我们推荐Amincon®Ultra 100kDa; 对于腺病毒，推荐Amincon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤，可以参考我们的病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关病毒）的制备方法供参考。

Q: Amicon® Ultrar超滤管可以用酒精消毒灭菌么？

A: Amicon® Ultra与70%乙醇是兼容的，但是我们对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无法提供更进一步的参考信息。

Q: Amicon® Ultra超滤装置是否可以用于高压灭菌？

A: Amicon® Ultra都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。

Q: Amicon® Ultra超滤管是否不含RNA酶？

A: 我们不保证超滤管不包含RNA酶，建议您可以用0.1%DEPC在37度浸泡2小时，以完全灭活RNA酶C残留的DEPC可以用Milli-Q®超纯水洗涤除去。

Q: 用Amicon® Ultra超滤管去除去污剂是有什么需要注意的吗？

A: 去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团分子而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果，具体的操作步骤请垂询默克密理博技术支持专线400-889-1988-2分机。

Q: 我的蛋白在浓缩时出现了沉淀为什么？

A: 蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。我们建议蛋白浓缩后的zui终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，我们建议的改进方法是：

1）离心力降为推荐离心力的30%-50%

2）改选择截留分子量更大的过滤装置（如原本选用10k，此时可以选择30k）

3）在浓缩过程中取出超滤管，用枪头反复吹吸几次

Q: 浓缩后我发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因是？

A: shou先，Amicon® Ultra超滤管的zui低起始蛋白浓度为25ug/ml.请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。

其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃您的样本滤过液用以分析可能的原因：

1）如果您的样本在滤过液中，那么请排查：

a) 您是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？

b) 使用的离心力是否是在授权范围内？如果您使用的是rpm，请换算成相应的g离心，具体换算方法请参考：

https://www.msu.edu/~venkata1/gforce.htm

c) 离心机zui近是否有校准过？

d) 您是否shou次尝试这个蛋白？如果能确保你用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是您的目的蛋白的原因。

有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。

2）如果您的样本也不在滤过液中：

a) 您的样本起始蛋白浓度是否大于25ug/ml？

b) 您用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？

c) 您的目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。

Q: 有时候我用超滤离心管连水都离不下来，可能是什么原因？

A: Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况，先用0.1N NaOH清洗再离心。zui后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。