产品介绍：

在高离序盐存在的情况下，琼脂糖凝胶溶解后DNA片段选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

3.溶胶液加酚红调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。

4.改进的溶胶液配方，大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内，不需要加醋酸调节PH。

5.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

注意事项

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12,000 rpm的传统台式离心机。

2.溶胶液和平衡液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.回收纯化的DNA片段一般在70 bp到40 kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。本试剂盒即使回收70 bp小片段也有突出领先的回收效率。

4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15 μg，100 bp-5 kb的DNA片段，回收率可高达85％。

5.切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。

6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在-20°C。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

操作步骤

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中按照标签指示加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

1.在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。

2.将切下的含有DNA条带凝胶切成小块放入1.5ml离心管，称重。

▲ 先称一个空1.5 ml离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。

3.加3倍体积溶胶液DD。

▲如果凝胶重为100 mg，其体积可视为100 μl，则加入300 μl溶胶液。

▲如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液。

4.56°C水浴放置10 min（或直至胶完全溶解）。每2-3 min涡旋震荡一次帮助加速溶解。

5.可选,一般不需要：每100 mg最初的凝胶重量加入150 μl的异丙醇，震荡混匀。

▲ 有时候加入异丙醇可以提高回收率，加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时，不加入异丙醇，加入有时反而可能降低回收效率。

6.柱平衡：向吸附柱EC中加入100 µl平衡液，12,000 rpm 离心1 min，弃滤液，备用。

▲ 平衡液可以增强硅胶膜的吸附核酸能力，请使用当天处理的吸附柱。

7.将上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min，弃滤液。

▲ 如果总体积超过750 μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。

▲ 过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色，此为酚红pH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。

8.加入600 µl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm离心30 sec，弃滤液。再加入600 µl漂洗液WB重复漂洗一次，弃滤液。

9.将吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm离心2 min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10.取出吸附柱，放入一个干净的离心管中 ，在吸附膜的中间部位加50 µl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 80°C-90°C水浴中预热可提高产量），室温放置2 min，12,000 rpm 离心1 min，弃吸附柱。 

▲ 推荐：为了增加DNA的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1 min，12,000 rpm离心1 min。洗脱两遍可提高浓度约10%。

▲ 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是需注意体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量（最小不应少于25 µl）。