一、概述

PCR（聚合酶链反应）仪是一种用于在体外扩增DNA片段的仪器。它基于聚合酶在一系列温度变化的循环中，通过特定的引物对DNA进行模板引导合成，从而快速产生大量的目标DNA。

二、PCR仪的使用步骤

1、准备PCR反应体系：将DNA模板、引物、DNA聚合酶、缓冲液和dNTPs等反应组分混合在一起，并加入适量的水。

2、PCR仪的温度程序：根据所需的扩增条件，设置PCR仪的温度程序，包括初始变性、循环变性、退火和延伸等步骤。

3、加载反应混合液：将PCR反应混合液分装到PCR管或板中。

4、开始PCR反应：将PCR管或板放入PCR仪，启动温度程序，让PCR仪按照设定的温度和时间变化进行扩增反应。

5、结束PCR反应：PCR反应结束后，可以通过电泳或其他方法进行目标DNA的分析。

三、以下以Bio-Rad T100操作方法为例进行详解

1、打开仪器开关，显示触屏主界面

①New Protocol：创建一个新的反应程序

②Saved Protocols：查看、编辑、运行已储存的反应程序

③Incubate：孵育功能

④Tools：设置、仪器自检、仪器信息、软件升级等

2、创建新程序

点击触屏界面的“New Protocol”按钮，进入编辑界面。

①设置反应体积，在Volume 中输入体积数，可输入范围为1-100ul, 推荐反应体积为15-50ul。

②设置热盖的温度，在Lid中输入温度，可输入范围为40-110℃，推荐温度为105℃。

③点击反应程序的每一步时，显示为绿色，分别设置该步反应的温度和时间。

点击温度按钮，如95℃，出现数字键盘，输入需要的温度，点击“OK”，确认。同样的操作编辑时间。

3、插入新的反应步骤

点击一个步骤，显示为绿色，点击“Insert”将在该步骤后面插入新的反应步骤。

在“Insert Step”界面选择需要插入反应步骤的类型；

①“Temperature”即可插入温度反应；

②“Gradient”即可插入温度梯度反应,；

③“GOTO”即可插入PCR循环反应，可设置循环的起始反应步骤，如“Step2”,即循环反应从第2步开始至第4步结束，箭头指示的过程。；

点击“Delete”,即可删除选中的步骤。

4、设置温度梯度

选择一个反应步骤，点击“Options”

①选择“Gradient”；

②在“Back row”输入温度梯度的最高温度；

③在“Front row”输入温度梯度的最低温度，右边会显示从A到H每一行的温度值；

注意：不同的PCR仪温度梯度排列方向可能不同（从左到右或者从上到下排列）

5、温度的递增、时间的延伸和改变升温速率

选择一个反应步骤，点击“Options”, 进入步骤优化窗口。每一个实验步骤都包括“Increment”、“Extend”、“Ramp Rate”。

①“Increment”输入X，即每个循环后温度增加X℃；

②“ Extend”输入Y，即每个循环后时间延长Y秒；

③“Ramp Rate”输入Z，即升温速率为Z。

点击“OK”，确认。

点击“Run”，无需储存，直接运行编辑好的反应程序。也可点击“Save”按钮, 进入储存界面。

6、反应程序暂停

PCR反应程序运行时，是允许暂停的。暂停时，加热模块会维持在当前实验步骤的反应温度，热盖也维持原本的温度，直到反应程序恢复继续运行。

当正在升温或降温时，如果程序暂停，仪器会继续升温或降温，直到到达设定的温度，才会保持不变。

在“Status”状态时，点击“Pause”按钮，反应程序暂停。点击“Resume”按钮，反应程序继续运行。

7 、跳过反应程序中的某一步，可以缩短反应时间。

点击“Skip Step”按钮，即可跳过当前步骤，多次点击“Skip Step”按钮，即可跳过多个步骤。

8、取消反应程序。

当程序取消时，加热模块立刻停止温度加热。不要立即关闭仪器电源，仪器需要时间使加热模块降温。在“Status”状态时，点击“Cancel”按钮, 选择“Yes”确认。

9、选择编辑储存的程序

点击触屏界面的“Saved Protocols”按钮，选择一个程序，点击“Edite”，进入编辑界面，操作方法同上。