注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴融化细胞，然后尽快移入培养物(液)中，尽量减少操作。

准备

    1.准备纤维连接蛋白包被的培养瓶(2 μg /cm2，推荐用T-75的培养瓶)。向培养瓶中加入10 ml无菌Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），然后加入150 μl 纤维连接蛋白原液(1 mg/ml, Sigma cat. no. F1141)。将培养瓶放入培养箱中孵育过夜。

    2.准备完全培养基：用70%的酒精消毒培养基和添加物的外表面，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物管并用吸管将其加入到基本培养基中。以保证添加物全部加入基本培养基中。

    3.吸出纤维连接蛋白溶液并向瓶内加入20 ml完全培养基。将培养瓶放入超净台中，然后准备融化细胞。纤维连接蛋白溶液可以使用两次。

    4.将小瓶放入37°C水浴中，握住并轻轻旋转小瓶直到其内细胞完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹。eppendorf吸管轻轻重悬管内容物。

    5.将管内容物均匀的放入纤维连接蛋白包被的培养瓶中。推荐的接种密度为7,500 cells/cm2。

    注意：不推荐在细胞融化后进行稀释和离心，因为这些操作比培养基中的DMSO残留物对细胞的伤害更大。需要注意的是，内皮细胞接种在纤维连接蛋白包被的培养瓶中能够促进细胞的帖壁。

    6.盖好培养瓶的盖子，轻轻地摇动培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则适当放松瓶盖。

    7.将培养瓶放入培养箱中。

    8.为了得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔**进行如上操作。培养良好的细胞将呈现鹅卵石形或纺锤体形，细胞质无颗粒且细胞数量在培养2-3天后会倍增。